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發(fā)布時(shí)間:2023-02-16 16:18:40 作者:學(xué)術(shù)小編 來(lái)源:www.derer.cn
實(shí)驗(yàn)一:蛋白質(zhì)含量測(cè)定方法的研究---非蛋白物質(zhì)的可能干擾及其干擾程度的研究分析 摘要:本次實(shí)驗(yàn)通過(guò)分別利用三種方法(Folin-酚法,考馬斯亮藍(lán)(G-250),紫外法)平行測(cè)定純蛋白溶 液和生物材料中蛋白的含量,分別計(jì)算和比較每種材料通過(guò)三種方法測(cè)定結(jié)果的差異性。 再利用同時(shí)進(jìn)行 的11組實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)進(jìn)行整合分析。
比色法蛋白濃度測(cè)定蛋白質(zhì)通常是多種蛋白質(zhì)的化合物,比色法測(cè)定的基礎(chǔ)是蛋白質(zhì)構(gòu)成成分:氨基酸(如酪氨酸,絲氨酸)與外加的顯色基團(tuán)或者染料反應(yīng),產(chǎn)生有色物質(zhì)。 有色物質(zhì)的濃度與蛋白質(zhì)反應(yīng)的氨基酸數(shù)目直接相關(guān),從而反應(yīng)蛋白質(zhì)濃度。 雙縮脲(NH3CONHCONH3)是兩個(gè)分子脲經(jīng)180℃左右加熱,放出一個(gè)分子氨后得到的產(chǎn)物。
Bradford方法能夠利用96孔板檢測(cè)體積低至5 μL的蛋白質(zhì)濃度,然而很多plate reader不具備595 nm的濾光片。 這里要說(shuō)明的是,蛋白質(zhì)與染料產(chǎn)生的藍(lán)色復(fù)合物可以利用570-610 nm之間的任何波長(zhǎng)檢測(cè)到。