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發(fā)布時間:2023-02-11 19:05:57 作者:知網(wǎng)小編 來源:www.derer.cn
常用的蛋白質分離鑒定的方法有哪些? 讓人們感興趣的目標蛋白可以從不同來源的樣品獲得。 對于臨床診斷,蛋白質可以從患者的細胞或組織得到,對于實驗研究,可來自微生物或昆蟲、脊椎動物及植物的細胞系。
不同種類的蛋白質在分子大小方面有一定的差別,可用一些簡便的方法,使蛋白質混合物得到初步分離。 透析在純化中極為常用,可除去鹽類(脫鹽及置換緩沖液)、有機溶劑、低分子量的抑制劑等。 透析膜的截留分子量為5000左右,如分子量小于10000的酶液就有泄露的危險,在純化中極為常用,可除去鹽類、有機溶劑、低分子量的抑制劑等。
蛋白質在用鹽析沉淀分離后,需要將蛋白質中的鹽除去,常用的辦法是透析,即把蛋白質溶液裝入秀析袋內(常用的是玻璃紙),用緩沖液進行透析,并不斷的更換緩沖液,因透析所需時間較長,所以最好在低溫中進行。 此外也可用葡萄糖凝膠G-25或G-50過柱的辦法除鹽,所用的時間就比較短。
蛋白質的制備一般分為以下四個階段:選擇材料和預處理,細胞的破碎及細胞器的分離,提取和純化,濃細、干燥和保存。 微生物、植物和動物都可做為制備蛋白質的原材料,所選用的材料主要依據(jù)實驗目的來確定。